許多人都熟悉使用凝膠電泳分離大分子(如DNA)的方法。但是,凝膠電泳也可以用于分離蛋白質(zhì)。
不同的蛋白質(zhì)具有不同的大小,主要是由于氨基酸蛋白質(zhì)上的其結(jié)構(gòu)中構(gòu)件的數(shù)量。附著的化學(xué)修飾也會(huì)影響其大小。不同的蛋白質(zhì)也具有不同的電荷。這可能是由于用于構(gòu)建它們的氨基酸類(lèi)型以及與它們連接的修飾類(lèi)型所致。
不同類(lèi)型的電泳凝膠用于提供不同類(lèi)型的信息。因此,您選擇的凝膠類(lèi)型取決于您要提問(wèn)的類(lèi)型。
蛋白質(zhì)電泳
SDS-PAGE凝膠電泳從不同種類(lèi)鯊魚(yú)的血液中分離蛋白質(zhì)
通常,由聚丙烯酰胺制成的凝膠根據(jù)其不同大小用于分離蛋白質(zhì)。通常,首先要對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行加熱處理,然后再加入一種稱(chēng)為SDS的化學(xué)物質(zhì)為了以解開(kāi)蛋白質(zhì)。SDS是一種去污劑,可使所有蛋白質(zhì)具有相同的整體負(fù)電荷,因此,當(dāng)電流施加到凝膠上時(shí),分離僅是由于蛋白質(zhì)的大小。該技術(shù)稱(chēng)為SDS-PAGE(SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳)。
小蛋白分子在凝膠中的移動(dòng)比大蛋白更快,從而形成一系列“條帶”。每個(gè)條帶包含特定大小的蛋白質(zhì)。這些可以與已知大小的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較。
SDS-PAGE凝膠已用于根據(jù)大小分離蛋白質(zhì)。樣本是各種鯊魚(yú)的血液種。第一泳道包含已知大小的標(biāo)記。大蛋白在凝膠的頂部,小蛋白在底部。
該技術(shù)可能用于許多目的,包括純化特定的蛋白質(zhì),例如分離酶食品工業(yè)中的蛋白質(zhì)。
等電聚焦(IEF)和瓊脂糖凝膠電泳是蛋白質(zhì)可通過(guò)其不同電荷分離的兩種方法。與SDS-PAGE不同,蛋白質(zhì)通常保持其天然(折疊)狀態(tài)。所用凝膠的類(lèi)型以及凝膠周?chē)娜芤阂膊煌?/p>
在瓊脂糖凝膠電泳中,蛋白質(zhì)裝載在孔的中間。帶有強(qiáng)負(fù)電荷的蛋白以最快的速度向凝膠的正側(cè)移動(dòng),而帶正電荷的蛋白則以相反的方向移動(dòng)。
這種技術(shù)可以用于具有相同分子量的蛋白質(zhì)分開(kāi)重量但不同電荷,或當(dāng)大小并不重要(例如對(duì)疾病的發(fā)展過(guò)程中在不同的蛋白質(zhì)的存在的變化看)。