在開發特定細胞系的培養條件時，需要考慮許多參數。我們都知道pH平衡，氧氣水平和血清濃度是導致培養成功或失敗的重要變量。然而，包括與細胞需要相匹配的解離方法的亞培養方案同樣重要。考慮到這一點，我們將審查一些常見的解離實踐背后的原理，以幫助您根據細胞系的特定性質定制您的方法。

懸浮生長的細胞易于亞培養。只要將細胞稀釋到合適的新鮮培養基中，然后用完它們的營養供應，它們就會很好。另一方面，以單層生長的細胞彼此之間以及與培養皿發生蛋白質接觸。必須先打破這些細胞，然后將細胞懸浮在培養基中，旋轉并重新鋪板。因此，必須特別考慮確保解離條件破壞細胞接觸而不殺死細胞。

胰蛋白酶有時候，但并非總是如此

在決定解離條件時，研究者應考慮細胞產生的鍵的類型。一些貼壁細胞系僅產生微弱的接觸，可以通過簡單地將培養瓶撞擊在您的手掌上，或通過將燒瓶輕敲在臺面上來破壞。其他貼壁細胞系，特別是來自上皮細胞的貼壁細胞系，可形成強大的多蛋白質緊密連接，只能通過酶消化破壞; 在這些情況下，經常使用胰蛋白酶（絲氨酸蛋白酶）。來自上皮的細胞也可以表達鈣粘蛋白，其介導非常強的鈣依賴性粘附物或橋粒連接。在這種情況下，可能需要添加鈣螯合劑（如EDTA）來螯合鈣，以有效地解離細胞。

分離后優化活力

為了在解離后優化細胞活力，反應條件應與細胞接觸的強度相匹配。例如，如果標準胰蛋白酶/ EDTA消化（通常0.05％-0.5％）不能有效消化細胞鍵（在10-15分鐘內），則可能難以在細胞開始死亡之前從細胞中除去細胞，并且細胞活力將受到不利影響。在這種情況下，可能需要更高濃度的胰蛋白酶/ EDTA或其他酶，例如膠原酶。另一方面，如果反應太苛刻，細胞可能裂解或丟失重新附著到板上所需的表面蛋白質，并且任一情況都將導致活力降低。此外，裂解的細胞釋放基因組DNA，導致活細胞結塊，使存活細胞更難重新培養，并且需要添加DNase。

準備是良好分離的關鍵

如果您已將反應強度與細胞系的粘附特性相匹配，但您的細胞仍難以去除，您可能會發現問題在于細胞準備解離的方式。在生長培養基中可能存在抑制胰蛋白酶的元素，例如血清，但是這可以通過在添加解離試劑之前用Dulbecco's PBS（不含鈣或鎂）簡單地沖洗細胞一次或兩次來克服。也可能是細胞保持融合的時間過長。在這些條件下，細胞可能會形成特別強的細胞 - 細胞和細胞 - 表面連接，這些連接特別難以破碎。出于這個原因，以及培養物的整體健康狀況，建議細胞在融合之前進行傳代（即，

結論

通過對解離試劑的工作原理的基本了解，研究人員可以開發出一種優化的方案，該方案同時考慮細胞粘附性的強度和質量。優化的細胞解離方案將確保成功的傳代培養并延長培養細胞的壽命。

Carolyn Peluso博士是ATCC的技術作家和細胞生物學專家。