問題：生命科學(xué)研究的支柱，蛋白質(zhì)印跡通常用于評估相對蛋白質(zhì)表達(dá)差異，例如當(dāng)調(diào)查細(xì)胞信號傳導(dǎo)途徑時。精確的量化需要仔細(xì)注意程序細(xì)節(jié)和歸一化。傳統(tǒng)上，western印跡是兩天的過程，具有許多步驟：電泳，轉(zhuǎn)移，阻斷，初次和二次抗體應(yīng)用和檢測。優(yōu)化通常是具有挑戰(zhàn)性的，因?yàn)楫?dāng)印跡失敗時，很難確定它是導(dǎo)致抗體結(jié)合和檢測的步驟的結(jié)果，還是該問題是否是由于抗體本身。

解決方案：一個可以幫助的系統(tǒng)是來自Bio-Rad Laboratories，Inc。的V3 Western Workflow TM，其使用無污染技術(shù)來確認(rèn)蛋白質(zhì)分離和轉(zhuǎn)移如預(yù)期進(jìn)行，隨后的免疫檢測將產(chǎn)生高質(zhì)量的western印跡數(shù)據(jù)。這種新系統(tǒng)將工作流程時間減半，而無污染技術(shù)確保更快，更準(zhǔn)確地定量蛋白質(zhì)表達(dá)水平。

V3 Western Workflow將Bio-Rad的TGX Stain- Free™預(yù)制凝膠，TransBlot®Turbo™傳輸系統(tǒng)和ChemiDoc™MP成像系統(tǒng)集成為一個集成解決方案。

這樣的系統(tǒng)通過電泳和轉(zhuǎn)移步驟可以節(jié)省大量的時間。例如，TGX無染料凝膠上的運(yùn)行時間為15分鐘，而傳統(tǒng)迷你凝膠的運(yùn)行時間為45分鐘。同時，Trans-Blot Turbo在7分鐘內(nèi)實(shí)現(xiàn)了蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移，相比之下，傳統(tǒng)油罐方法的轉(zhuǎn)化時間為1小時或過夜。轉(zhuǎn)印效率可比。

凝膠中嵌入的無污染技術(shù)通過允許容易的質(zhì)量控制為蛋白印跡過程增加信心。使用ChemiDoc MP成像系統(tǒng)和TGX無染料凝膠，研究人員可以在一分鐘內(nèi)可視化電泳后凝膠結(jié)果，以確保樣品不會降解。這代表了比傳統(tǒng)的考馬斯凝膠染色方法顯著的進(jìn)步，其可能需要長達(dá)兩個小時來完成，并且不是免疫印跡相容的。ChemiDoc MP還允許研究人員在印跡檢測前檢查膜，并立即可視化蛋白轉(zhuǎn)移。凝膠隨后可以重新成像以確定是否有任何蛋白質(zhì)殘留。

重要的是，無染色成像使總蛋白標(biāo)準(zhǔn)化更準(zhǔn)確的定量。總蛋白標(biāo)準(zhǔn)化已顯示比常規(guī)管家蛋白更一致，其在某些實(shí)驗(yàn)條件或樣品類型下可變地進(jìn)行。因此，無污漬技術(shù)可以通過消除管家蛋白檢測所必需的連續(xù)探測或剝離和重復(fù)步驟來減少四小時western印跡標(biāo)準(zhǔn)化過程

雖然更快的進(jìn)程通常會以數(shù)據(jù)質(zhì)量為代價，像V3 Western Workflow這樣的系統(tǒng)可以提供更快的結(jié)果，同時提高這些結(jié)果有效的信心。

V3 Western工作流程由五個步驟組成，每個步驟由Bio-Rad的印跡儀器和/或產(chǎn)品系列實(shí)現(xiàn)：

1.蛋白分離：Bio-Rad的Criterion™和Mini-PROTEAN®TGX無色™預(yù)制凝膠

2.可視化蛋白質(zhì)：ChemiDoc™MP成像系統(tǒng)

3.轉(zhuǎn)移蛋白：TransBlot®Turbo™轉(zhuǎn)移系統(tǒng)

4.驗(yàn)證傳輸：ChemiDoc MP成像系統(tǒng)

5.驗(yàn)證蛋白質(zhì)印跡：ChemiDoc MP成像系統(tǒng)