試劑:
瓊脂糖(Agarose)、甲醛、甲酰胺、MOPS、EDTA、DEPC水。
步驟
一 5 x MOPS-EDTA Buffer的配制(0.1 M MOPS pH7; 5mM EDTA; 10mM NaAc) 1. 稱量20.9g的MOPS,置于1L燒杯中。 2. 加700mL DEPC水溶解。 3. 用2N NaOH調(diào)節(jié)pH**7.0
4. 在上述溶液中加入10mL的1M的NaAC 5. 溶液中加入10mL的0.5M的EDTA pH=8.0 6. 加DEPC水定容**1L
7. 用0.45um濾膜過濾后避光保存
二 RNA樣品處理方法
混合均勻后,70°C加熱5min,迅速冷卻**室溫。(
PCR儀操作)
三 甲醛變性瓊脂糖凝膠的制備 加1g瓊脂糖到31mL DEPC水中,另加10mL 5 x MOPS-EDTA Buffer煮沸溶解。加入DEPC水定容**41mL。將溶液冷卻**60°C左右,加入9mL 37%甲醛,倒入膠槽中靜置1小時(shí)。(膠中加入EB染料) 四 電泳
混勻
電泳槽中的1 x MOPS-EDTA Buffer電泳液,加樣,10v/cm條件下電泳約1小時(shí)。電泳期間每隔15min混勻
電泳槽中的電泳液一次。